Gertrudes é a rainha da Dinamarca, mãe de Hamlet, viúva do rei morto e casada com Cláudio, irmão dele. O espectro diz que Cláudio a seduziu e pede a Hamlet que não a castigue: "Entregue-a aos céus".
No Ato I, cena 2, ela se junta ao rei para pedir que Hamlet fique: "Rogo-te, fica junto a nós; não voltes a Wittenberg." No Ato III, cena 4, Hamlet a confronta no quarto, diante dos retratos dos dois maridos, e ela grita por socorro. Polônio, escondido, se agita atrás da cortina e é morto por Hamlet. A rainha diz que vê em si "manchas tão negras e profundas", não vê o espectro que Hamlet vê e conclui: "Oh, tristeza! Ele está louco."
No Ato IV, cena 1, conta a Cláudio que Hamlet matou Polônio e o descreve como "Louco feito o mar e o vento", dizendo que "ele chora pelo que fez". Depois recebe Ofélia enlouquecida e é ela quem conta a Laertes que a moça se afogou. No enterro, joga flores: "Flores para a mais bela flor. Adeus!"
O quanto ela sabia do crime, a peça não esclarece: quando Hamlet diz que o gesto dele é quase tão terrível quanto "matar um rei e casar com o irmão", ela responde só "Matar um rei!". No Ato V, cena 2, bebe a taça envenenada, mesmo depois de Cláudio pedir que não beba: "Beberei, senhor; peço-lhe que me perdoe."