Polônio é o lorde camerlengo, o conselheiro principal do rei Cláudio e pai de Laertes e de Ofélia. Ao se despedir do filho, que parte para a França, dá uma lista de conselhos que termina em "Isto acima de tudo: Sê verdadeiro contigo mesmo".
Controla os filhos. Proíbe Ofélia de falar com Hamlet ("Obedece, eu te ordeno.") e manda o criado Reinaldo espionar Laertes em Paris, explicando o método: "Vedes como, com a isca da mentira, Pescastes o peixe da verdade?"
Conclui que Hamlet enlouqueceu de amor por Ofélia e esconde-se com o rei para espiar o encontro dos dois, no Ato III, cena 1. Na cena 3, avisa o rei de que ficará atrás da tapeçaria para ouvir a conversa de Hamlet com a mãe: "Atrás do arrás, estarei a postos Para tudo ouvir".
Morre no quarto da rainha: ao ouvi-lo se agitar e gritar por socorro, Hamlet fura a cortina com a espada e diz "Ora essa! Um rato?", convencido de que mata o rei. Só depois vê que é Polônio. Cláudio admite no Ato IV, cena 5, que o enterraram em segredo, e que isso deixou o povo inquieto; Laertes volta da França exigindo explicações.