Lady Macbeth é a mulher de Macbeth e a senhora do castelo de Inverness, onde o rei Duncan vai dormir. É ela quem assume o plano do assassinato e, no fim, quem aparece sonâmbula, esfregando uma mancha de sangue que não sai.
No Ato I, cena 5, lê a carta em que o marido conta a profecia das bruxas e o acha cheio demais "do leite da bondade humana" para tomar o atalho. Invoca espíritos para que a encham de crueldade. Na cena 7, quando Macbeth recua, ela lhe diz que "levas a vida como um covarde" e expõe o plano: embebedar os camareiros e pôr neles a culpa.
No Ato II, cena 2, ela drogou os camareiros e deixou as adagas à vista; diz que teria cometido o ato ela mesma se o rei, dormindo, não lembrasse tanto o pai dela. Quando Macbeth volta abalado, leva as adagas, suja de sangue os camareiros e diz: "Um pouco d’água irá nos limpar deste ato." No Ato III, cena 2, já rei, Macbeth lhe esconde o plano contra Banquo: "Preserva tua ignorância, meu amorzinho querido, e fica inocente até o momento de aplaudires o ato cometido." No banquete (cena 4), ela tenta acobertar o fantasma que só o marido vê e despacha os nobres.
No Ato V, cena 1, caminha dormindo com uma vela e diz: "Sai, mancha maldita!" Na cena 5, Seyton anuncia: "A Rainha, meu Senhor, está morta." No fim, Malcolm diz que, "como se acredita", ela tirou a própria vida.