Macduff é o Barão de Fife, o nobre que descobre o corpo de Duncan, foge para a Inglaterra, perde a família num massacre ordenado por Macbeth e acaba matando o tirano.
No Ato II, cena 3, vai chamar o rei por ordem dele e volta gritando: "Oh, horror, horror, horror!" Não vai a Scone para a coroação de Macbeth e segue para Fife (cena 4). Depois falta ao banquete do novo rei, e no Ato III, cena 6, um lorde conta que ele foi à Inglaterra pedir ao rei Eduardo apoio a Malcolm.
No Ato IV, cena 1, a primeira aparição das bruxas avisa Macbeth: "Acautele-se contra Macduff, acautele-se contra o Barão de Fife." Ao saber que Macduff fugiu, Macbeth decide tomar de surpresa o castelo dele e passar a família ao fio da espada. Em Fife, a mulher de Macduff o acusa de abandoná-los ("Ele não nos ama."), e assassinos matam o filho (cena 2). Na Inglaterra, Malcolm testa a lealdade de Macduff, e Ross lhe conta: "O seu Castelo foi assaltado, sua esposa e filhos brutalmente assassinados." Malcolm lhe diz: "Deixe a dor converter-se em raiva."
No Ato V, cena 7, enfrenta Macbeth, que diz: "Dentre todos os homens, evitei justamente tua pessoa." Macbeth afirma que nenhum nascido de mulher pode matá-lo, e Macduff responde que foi arrancado do ventre da mãe antes do tempo. Depois do duelo, volta com a cabeça de Macbeth e saúda Malcolm como rei.